Verbleib von antibiotikaresistenzgenen in pflanzenkläranlagen.Im Fokus werden Chinolone stehen.

- praktisches erlernen des betriebs von pflanzenkläranlagen inkl. Messung verschiedener Summenparameter zur Abwassercharakterisierung wie chemischer Sauerstoffbedarf

-Analyse von Chinolonen in Proben aus Pflanzenklaranlagen

-Isolation von DNA proben aus Pflanzenkläranlagen

- Quantitative Nachweis mit quantitiver PCR von des Antibiotikaresistenzgenen qnr

- Isolation und molekularbiologische Charakterisierung von Chinolon-resistenten bakteria aus Pflanzenklaranlagen

Verbleib von Antibiotikaresistenzgenen in Pflanzenkläranlagen

1.Vorwort.

Die in der letzten Zeit durchgeführten Untersuchungen zeugen von Durchdringen der arzneiresistenten Bakterien in die Umwelt. Hauptsächlich dringen die Antibiotika in die Umwelt mit den Abwässern durch. Jahr für Jahr erhöht sich der Antibiotikaverbrauch in der Welt. Die Bakterien haben sich ein Immunsystem gegen Pharmazeutika in der Umwelt entwickelt, und nämlich z.B. Antibiotikaresistenz.

2.Ziel.

Ziel unserer Untersuchung war die Entdeckung der antibiotikaresistenten Bakterien und Genen. Die Untersuchungen wurden zwecks Entdeckung von gegen Chinolone resistenten Genen geführt. Wir wollten vor allen das qnrS Gen entdecken, das mit der Resistenz durch Ciprofloxacin verbunden ist.

3.Methoden und Techniken.

Die entnommenen Proben stammten von Pflanzenkläranlage in Langenreichenbach in Deutschland. Untersuchungmateriall wurde auf Müller-Hinton-Agar vorbereitet. Weiterhin wurden die Petrieschalen im Inkubator 24 Stunden bei 35 Grad aufbewahrt. Nach der Inkubation hat man die DNA abgesondert.Das wie oben beschrieben vorbereitete Material konnte weiter untersucht werden. Um die Gene zu entdecken mussten wir die PCR Methode anwenden. Die PCR Methode folgt auf Absonderung der DNA-Fragmente und Möglichkeit der Feststellung ihrer Länge. Die Entdeckungen der gegebenen Kette in der untersuchten Probe ist auch möglich. Bei der PCR Untersuchungen haben wir folgendes genutzt: GoTaq® Green Master Mix und die Primer in entsprechenden Ketten. Zur Elektrophorese hat man das Agarose-Gel 1,5% genutzt. Nach Elektrophorese wurde das Gel in Ethidiumbromid platziert und weiter hat man die Visualisierung der Ergebnisse gefertigt. Dank dem Produkt aus PCR konnten wird klonen um den Standard des qnrS Gens zur qPCR Untersuchung durchzuführen.

4.Ergebnisse.

Es wurden drei Gene entdeckt : qnrC, qnrD, qnrS. Unser Interesse lag bei qnrS Gen, das direkt mit der Resistenz auf Ciprofloxacin verbunden ist. Das wurde in den Protokollen aus Faulbehälter entdeckt.
Das Klonen verlief erfolgreich. Dank dem Produkt aus PCR haben wir den Standard zur Quantitativuntersuchung qPCR gesetzt.